關(guān)于手性化合物、手性分析、手性填料和手性柱，現(xiàn)在的理論很多，講的也比較復(fù)雜，我看了很多也不是特別明白，做分析三年多，分過(guò)的手性化合物最少也有幾千種，拿到手里的消旋體幾乎沒(méi)有分不開(kāi)的，沒(méi)用到什么理論，主要都是經(jīng)驗(yàn)，這里還是揀最實(shí)用的來(lái)講。

　　手性分析可以使用普通的色譜柱，需要流動(dòng)相中添加手性分離試劑，也可以直接用固定相為手性填料的手性色譜柱，前者使用較少，大家更多的是使用商品化的手性色譜柱。

　　手性分析包括氣相和液相兩種，這個(gè)主要和樣品的物理性質(zhì)有關(guān)系，現(xiàn)在的手性化合物絕大多數(shù)都不能做氣相，所以氣相手性色譜柱無(wú)論從數(shù)量還是質(zhì)量上來(lái)講都不能與液相手性色譜柱相提并論。

　　一、手性柱

　　手性分離最重要的是選擇一根好的手性柱，說(shuō)到手性柱就不得不提大賽璐，做手性分析的都知道，大賽璐的手性柱目前市場(chǎng)占有率最高，大家最熟悉的可能是OD-H，很多文獻(xiàn)中都有報(bào)導(dǎo)。大賽璐公司最初有四種填料，結(jié)構(gòu)類(lèi)似，對(duì)應(yīng)的色譜柱分別是OD、AD、OJ和AS，粒徑10um，后來(lái)填料粒徑變?yōu)?um，就是賣(mài)的最多、使用范圍最廣的柱子，號(hào)稱(chēng)四大金剛，分別是OD-H、AD-H、OJ-H和AS-H，在柱子名稱(chēng)后邊加“-H”，意思應(yīng)該是高效，這些柱子都只能做正相使用，為了在反相色譜中使用開(kāi)發(fā)的柱子在相應(yīng)的色譜柱名稱(chēng)中添加了一個(gè)“R”。

　　上述色譜柱都屬于涂覆型填料，不耐溶劑，使用起來(lái)受樣品溶解性的限制，最近又開(kāi)發(fā)了鍵合相手性柱，可以使用幾乎所有的常見(jiàn)溶劑做流動(dòng)相，新的溶劑還提供了新的選擇性，進(jìn)而提升了色譜柱的分離能力，主要是IA、IB和IC，其中IA對(duì)應(yīng)AD-H，IB對(duì)應(yīng)OD-H，IC是新開(kāi)發(fā)的填料。和反相柱的發(fā)展趨勢(shì)一樣，大賽璐的手性柱也通過(guò)減小粒徑來(lái)獲得更高的柱效，最新的手性柱填料粒徑是3um。另外大賽璐還有其它一些手性色譜柱，但是遠(yuǎn)不及上述幾種。

　　二、樣品前處理

　　說(shuō)到手性分析，樣品的前處理非常重要。首先是消旋體樣品的普通液相純度問(wèn)題，樣品的純度低了，看到手性柱上分離開(kāi)的幾個(gè)峰讓人無(wú)從判斷究竟對(duì)映異構(gòu)體有沒(méi)有分離開(kāi)，分離開(kāi)的幾個(gè)峰哪個(gè)是雜質(zhì)峰哪個(gè)是對(duì)映異構(gòu)體的峰，所以樣品的純度要盡量的高，一般我們的要求是樣品的純度能達(dá)到90%以上，純度低的樣品需要做進(jìn)一步的純化。

　　關(guān)于對(duì)映異構(gòu)體峰的判斷，現(xiàn)在比較好的手段是使用旋光檢測(cè)器，在色譜圖上可以直接看到分離開(kāi)的兩峰吸收一正一負(fù)，再有就是使用DAD檢測(cè)器，通過(guò)看兩峰的紫外吸收是否一致來(lái)做判斷。樣品前處理的另外一項(xiàng)是稀釋問(wèn)題，這個(gè)問(wèn)題最容易被忽視，處理不好會(huì)直接導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。我們都知道反相樣品稀釋的時(shí)候需要盡量使用流動(dòng)相做稀釋劑，且稀釋劑里水含量要盡量高一些，這個(gè)要求對(duì)于手性分析同樣適用，正相的手性分析要求樣品稀釋溶劑盡量要求，就要犧牲手性柱壽命來(lái)?yè)Q分離。

　　很多時(shí)候我們拿到手的樣品比較難溶，畢竟乙醇和異丙醇不是非常好的溶劑，即便是二氯甲烷、四氫呋喃、DMF或者DMAC也會(huì)遇到溶解性比較差的樣品，通常此類(lèi)樣品分子式都相對(duì)比較復(fù)雜，分子量偏大，結(jié)構(gòu)中含有帶N的顯堿性基團(tuán)和顯酸性基團(tuán)，此類(lèi)樣品可以通過(guò)稀釋樣品時(shí)加酸或者堿來(lái)促進(jìn)其溶解，但是加入的酸或堿含量不宜太高，濃度不宜過(guò)大。

　　很多化合物為了增加其穩(wěn)定性，都要做成鹽來(lái)保存和轉(zhuǎn)移，常見(jiàn)的包括鹽酸鹽、三氟乙酸鹽、甲基磺酸鹽、酒石酸鹽以及其它更復(fù)雜的鹽，這些鹽類(lèi)也是可以直接拿來(lái)做手性分析的，無(wú)論是正相還是反相都可以，只要樣品能用合適的稀釋劑溶解，當(dāng)然樣品游離出來(lái)做手性分析會(huì)更好。

　　再有就是很多樣品因?yàn)橐合鄾](méi)有紫外吸收、氣相不能氣化而不能直接做手性分析，這時(shí)就要衍生，衍生最多的樣品可能就是氨基酸了。氨基酸衍生方法可以是給氨基上衍生CBZ做液相，或者是用HCl(HBr)的乙醇(甲醇、異丙醇)溶液加三氟乙酸酐將羧基衍生成酯，氨基衍生成酰胺來(lái)做氣相。

　　最近比較流行的氨基酸衍生方法是用苯異硫氰酸酯(也叫異硫氰酸苯酯)衍生氨基來(lái)做手性分析，此方法當(dāng)然也可以用來(lái)做普通的氨基酸液相純度分析，這個(gè)衍生方法要求化合物分子結(jié)構(gòu)中的N原子上至少連接有一個(gè)H，所以只要是分子結(jié)構(gòu)中含有帶有至少一個(gè)H原子的N結(jié)構(gòu)，化合物都可以用此方法衍生。需要指出的是，做手性分析的原則是能不衍生就不衍生，因?yàn)檠苌锌赡軙?huì)引起樣品手性純度下降，即消旋。

　　總結(jié)一下，手性分析中使用的消旋體純度一定要好，最好能配合DAD檢測(cè)器或者是旋光檢測(cè)器來(lái)做分析方法開(kāi)發(fā)。樣品在稀釋時(shí)盡量用流動(dòng)相相同種類(lèi)的溶劑做稀釋劑，稀釋劑中醇類(lèi)的含量不宜超過(guò)流動(dòng)相中醇類(lèi)的含量，難溶的樣品盡量不要用其它的溶劑，一方面可能會(huì)傷害柱子，另一方面容易導(dǎo)致峰形變差，但實(shí)際操作過(guò)程中很多時(shí)候?yàn)榱诉_(dá)到分析目的，還不得不犧牲柱子的壽命，而且即便是使用純的乙醇或者是異丙醇做稀釋劑也不是不可以，只要是稀釋劑和流動(dòng)相能夠互溶就行。