你了解手性分析是什么嗎？手性分析很關(guān)鍵的一項(xiàng)是流動(dòng)相的選擇，手性分析一般都采用正相，使用多的流動(dòng)相是正己烷、正庚烷、乙醇和異丙醇這四種，其中起洗脫作用的流動(dòng)相是乙醇和異丙醇，正己烷和正庚烷用來調(diào)節(jié)流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度。正己烷和正庚烷對(duì)于樣品分離沒有什么太大的影響，不會(huì)改變選擇性和分離度，通常都可以混用，不過正庚烷比正己烷對(duì)人體的傷害要小很多，但價(jià)格是后者的一倍，所以歐美的很多大制藥公司多使用正庚烷，而國(guó)內(nèi)多使用正己烷。

　　乙醇和異丙醇對(duì)樣品的分離起關(guān)鍵的作用，不同的醇有不同的選擇性，改變醇的種類可以改變選擇性，常用的醇類是乙醇和異丙醇，甲醇不能使用是因?yàn)樗驼和?、正庚烷不互溶，叔丁醇粘度太大，一般作為添加劑配合乙醇或者異丙醇少量使用，提供特殊的選擇性，通常能起到意想不到的效果。一般情況下分析手性樣品，很多人推薦異丙醇，因?yàn)橐掖細(xì)馕侗犬惐己靡稽c(diǎn)，且乙醇做流動(dòng)相壓力要低一些，實(shí)際上二者差別不是太大。

　　流動(dòng)相里經(jīng)常需要添加酸或者是堿來調(diào)節(jié)峰形，常用的酸有、乙酸和甲基磺酸，堿一般是二乙胺和三乙胺，也有用乙醇胺和異丁胺的，流動(dòng)相里添加酸和堿的濃度一般要求控制在0.2%(體積比)以下，我們一般用0.1%，使用的原則一般是酸性樣品加酸，堿性樣品加堿，但實(shí)際上很多樣品是即含酸性基團(tuán)又含堿性基團(tuán)，這就要看哪個(gè)基團(tuán)作用強(qiáng)了，對(duì)于某些含氨基的兩性樣品，例如苯甘氨酸，甲基磺酸是一個(gè)非常好的選擇，磺酸基能夠抑制氨基的堿性，又能提供一個(gè)酸性的流動(dòng)相環(huán)境，使樣品既能得到很好的分離又能獲得對(duì)稱的峰形。

　　一般做純度分析檢測(cè)雜質(zhì)含量時(shí)我們要求盡量的采用低波長(zhǎng)來讓盡可能多的雜質(zhì)有紫外吸收，而做手性分析時(shí)我們需要采用盡可能高的波長(zhǎng)來去除在低波長(zhǎng)下才有吸收的雜質(zhì)的干擾，一般原則還是盡量選擇樣品紫外吸收的地方來獲得較高的靈敏度，但流動(dòng)相里添加二乙胺會(huì)導(dǎo)致在低波長(zhǎng)下基線波動(dòng)變大，系統(tǒng)難以平衡，這種情況下一般要提高檢測(cè)波長(zhǎng)，實(shí)際操作過程中有些樣品在高波長(zhǎng)下吸收非常差，只能用低波長(zhǎng)檢測(cè)，這樣的樣品可以嘗試在樣品稀釋的時(shí)候加入過量的二乙胺(但不宜太多)，而流動(dòng)相用中性，從而獲得滿意的分析結(jié)果。

　　有些樣品只添加堿或者酸效果不好，可以嘗試在樣品里同時(shí)添加酸或者堿，這種情況下通過酸堿同時(shí)加入，zui后獲得了非常漂亮的峰形和良好的分離度。實(shí)際操作中有些樣品堿性太強(qiáng)，進(jìn)樣以后根本不成峰，低波長(zhǎng)下細(xì)看似乎能感覺到基線一直在漂，開始時(shí)懷疑樣品濃度不夠，加大樣品濃度以后仍看不到樣品峰，流動(dòng)相加入二乙胺或三乙胺以后再進(jìn)樣，得到比較漂亮的樣品峰。

　　流動(dòng)相里添加酸或者堿以后，基本上不會(huì)提供額外的選擇性，但是卻能提高分離度，因?yàn)榉逍魏昧?，相同的保留時(shí)間兩個(gè)峰之間的分離度自然就好了。但是流動(dòng)相里添加酸或者堿以后，會(huì)在柱子上殘留，即使長(zhǎng)時(shí)間用中性流動(dòng)相沖洗也不會(huì)有什么效果，這一點(diǎn)在鍵合相手性柱上表現(xiàn)的尤為明顯。

　　有時(shí)我們發(fā)現(xiàn)原來用中性流動(dòng)相分離很好的一個(gè)偏酸性的樣品，柱子用過堿性流動(dòng)相以后再用中性流動(dòng)相去做，發(fā)現(xiàn)樣品峰不能達(dá)到基線分離，拖尾嚴(yán)重，甚至不成峰，這時(shí)可以往流動(dòng)相里添加一滴酸，或者柱子用酸性流動(dòng)相沖洗一下再用中性的流動(dòng)相，一切又正常了，同理，用過酸性流動(dòng)相的柱子去做弱堿性的樣品會(huì)有一樣的問題。殘留在柱子上的酸或堿是用堿或酸性的流動(dòng)相來清洗，有條件的話盡量固定一只柱子只用酸性流動(dòng)相或只用堿性流動(dòng)相。