在藥物研究與分析中，液相色譜儀常見的一些錯誤操作可能導(dǎo)致這臺昂貴的設(shè)備在使用不久后就出現(xiàn)故障。那么，在液相色譜分析實驗室中，哪些操作是不可以進(jìn)行的呢？

1、流動相不經(jīng)過過濾。

由于灰塵或其他雜質(zhì)微粒可能會對柱塞、密封圈、缸體和單向閥造成磨損，因此必須在使用前清除流動相中的所有固體微粒。最佳選擇是在玻璃容器中進(jìn)行蒸餾，而常用的處理方法是過濾，可以使用0.2μm或0.45μm的濾膜等過濾器。泵的入口應(yīng)連接砂濾棒或片。輸液泵的過濾器需要定期清洗或更換。

2、使用后未能及時清潔泵。

流動相中不應(yīng)包含任何腐蝕性物質(zhì)。含有緩沖液的流動相在停泵期間，特別是過夜或更長時間時，不應(yīng)留存在泵內(nèi)。如果將含緩沖液的流動相留在泵中，可能由于蒸發(fā)、泄漏或溶液靜置而析出微細(xì)鹽晶體，這些晶體會像前面提到的固體顆粒一樣損壞密封圈和柱塞等部件。

因此，必須先將泵用純水充分清洗，然后再更換為適合色譜柱保存并有利于泵維護(hù)的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相，可以使用甲醇或甲醇-水混合液）。

3、流動相走空

在使用泵時，必須注意確保溶劑瓶中的流動相不會耗盡，否則即使空轉(zhuǎn)泵也會對柱塞、缸體或密封環(huán)造成磨損，最終可能導(dǎo)致液體泄漏。

如果沒有流動相流出且沒有壓力指示，應(yīng)該怎么辦？

可能是泵內(nèi)積聚了大量氣體，此時可以打開泄壓閥，讓泵以較大的流量（例如5ml/min）運行，以排出氣泡。此外，可以使用一個50ml的針筒在泵的出口處輔助抽出氣體。另一個可能的原因是密封環(huán)磨損，需要進(jìn)行更換。

4、壓力和流量變得不穩(wěn)定了嗎？

可能原因包括氣泡的存在，需要進(jìn)行排查；或者單向閥內(nèi)有雜物，可以將單向閥拆卸并浸泡在丙酮中進(jìn)行超聲清洗。有時候，砂濾棒內(nèi)可能會有氣泡，或者被細(xì)小的鹽晶體或滋生的微生物部分堵塞，此時可以將砂濾棒拆下，浸入流動相中進(jìn)行超聲去氣泡處理，或用稀酸（如4mol/L硝酸）迅速去除微生物，或者溶解鹽后立即進(jìn)行清洗。

5、壓力為何會出現(xiàn)過高或過低的情況呢？

可能是管道被堵，需要進(jìn)行清理和清洗。壓力降低的原因可能是管道存在泄漏。在檢查堵塞或泄漏時，應(yīng)逐段進(jìn)行。進(jìn)行梯度洗脫時，由于多種溶劑的混合及其成分的不斷變化，會帶來一些特殊問題，需予以充分重視：

在液相色譜中，對于組分復(fù)雜的樣品，通常采用梯度洗脫的方式。在同一次分析過程中，按照一定的程序持續(xù)調(diào)整流動相中各組分的濃度比例，這一過程稱為梯度洗脫。通過這種方法，可以使復(fù)雜樣品中性質(zhì)差異較大的組分根據(jù)各自適合的容量因子k實現(xiàn)良好的分離。

PS：梯度洗脫的優(yōu)點包括：1. 縮短分析時間；2. 提高分離效果；3. 改善峰型，減少拖尾現(xiàn)象；4. 增強靈敏度。不過，有時可能會導(dǎo)致基線漂移。

6、梯度洗脫時流動相選擇不合適。

需要注意溶劑之間的相容性，不可將不互溶的溶劑用作梯度洗脫的流動相。有些溶劑在特定比例下可以相互混溶，但超過這個比例后則會出現(xiàn)不互溶的現(xiàn)象，因此在使用時需要格外留意。

當(dāng)有機(jī)溶劑與緩沖液混合時，可能會出現(xiàn)鹽晶體析出，特別是在使用磷酸鹽時需特別謹(jǐn)慎。

7、忽視的空白梯度洗脫

梯度洗脫所用溶劑的純度要求較高，以確保良好的重現(xiàn)性。在進(jìn)行樣品分析之前，需要進(jìn)行空白梯度洗脫，以識別溶劑中的雜質(zhì)峰。因為在弱溶劑中，雜質(zhì)會在色譜柱的前端富集，之后會被強溶劑洗脫出來。此外，梯度洗脫所使用的溶劑應(yīng)進(jìn)行脫氣，以防在混合時產(chǎn)生氣泡。

8、忽略了溶劑混合引起的粘度變化。

混合溶劑的粘度通常會隨其組成變化，因此在梯度洗脫時常會出現(xiàn)壓力波動。例如，甲醇和水的粘度都較低，但當(dāng)兩者以相似比例混合時，粘度會顯著增加，此時的柱壓大約是單獨使用甲醇或水時的兩倍。因此，在進(jìn)行梯度洗脫時，應(yīng)注意避免壓力超過輸液泵或色譜柱的最大承受限度。

9、色譜柱的存儲與保養(yǎng)不當(dāng)。色譜柱是液相色譜儀的心臟，其性能直接影響分析結(jié)果。長時間不使用時，應(yīng)將色譜柱保存在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，通常是甲醇或乙腈，以防柱子干涸和微生物生長。同時，避免頻繁的柱溫驟變，以免損害柱效。

10、檢測器維護(hù)不足。紫外檢測器或熒光檢測器等需定期清潔光窗，以防灰塵或殘留物影響信號強度。同時，檢查光源是否老化，確保檢測靈敏度。對于質(zhì)譜檢測器，還需關(guān)注離子源的清潔和參數(shù)優(yōu)化。

11、數(shù)據(jù)處理與報告不規(guī)范。數(shù)據(jù)記錄應(yīng)詳盡，包括儀器參數(shù)、樣品信息、數(shù)據(jù)處理步驟等，便于結(jié)果追溯和質(zhì)量控制。報告編寫應(yīng)遵循相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可比性。

總之，液相色譜儀的正確操作與維護(hù)是藥物研究與分析中不可或缺的一環(huán)。通過避免上述錯誤操作，結(jié)合嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶嶒炘O(shè)計和數(shù)據(jù)處理，可以顯著提高分析效率和結(jié)果的準(zhǔn)確性，為藥物研發(fā)提供有力支持。因此，建議實驗人員不斷學(xué)習(xí)和實踐，以全面掌握液相色譜儀的操作技巧和維護(hù)知識。