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破解HPLC色譜峰面積重現(xiàn)性差難題

欄目:行業(yè)資訊 發(fā)布時間:2025-01-02
在使用高效液相(HPLC)色譜系統(tǒng)進行日常分析檢測的過程中,有時會遇到色譜峰峰面積重現(xiàn)性差的問題,導致無法對組分進行準確定量。

在使用高效液相(HPLC)色譜系統(tǒng)進行日常分析檢測的過程中,有時會遇到色譜峰峰面積重現(xiàn)性差的問題,導致無法對組分進行準確定量。

重現(xiàn)性是指不同分析人員或不同實驗室在各自的條件下所得分析結(jié)果的精密度,即使是給到了相同的開發(fā)方法也會有方法不重現(xiàn)的時候,這是什么原因呢?可以從色譜柱、儀器系統(tǒng)、方法本身的穩(wěn)定性這三方面去排查。

01
色譜柱問題的排查

首先檢查色譜柱的性能是否完好,觀察色譜峰形和柱效變化情況,確認色譜柱是否被污染。如果色譜柱被污染,可以使用更強的洗脫溶劑沖洗色譜柱。


如果是由于更換色譜柱導致方法不能重現(xiàn),那么就是色譜柱間的差異問題,同一種鍵合相,不同廠家的會不一樣,同一廠家的也有很多款,即使同一款色譜柱,還有批次差異問題。但一般情況下,同一款色譜柱,批次差異都是比較小的。

02
儀器系統(tǒng)的排查

儀器系統(tǒng)的排查可以從以下幾個方面進行排查:

1)進樣量
確認樣品是否過載,進樣量不符合要求或者進樣時操作失誤,都可能導致色譜峰面積重現(xiàn)性差。如果是使用手動進樣器且方法要求進樣量小于定量環(huán)體積,必須使用合格的小體積進樣針完成進樣,且盡可能控制每次進樣體積一樣。如果是使用自動進樣器,需檢查進樣系統(tǒng)是否存在氣泡、樣品瓶是否裝得過滿、是否存在進樣針座堵塞或漏液等。

2 )流動相

確認動相是否新鮮配制的,比例有無錯誤。檢查溶劑瓶里的溶劑過濾器是否長菌,有沒有被堵塞。樣品與流動相起始比例不兼容,有的樣品組分在梯度起始流動相里可能析出,需要調(diào)整合適的流動相。

3 )注射器

檢查注射器內(nèi)是否有氣泡,如果有氣泡,可以把注射器填充滿去除氣泡,或者使用脫氣溶劑。

4 )核查檢測器參數(shù)
應(yīng)核查檢測器的各項參數(shù):比如UV檢測器的溫度(若設(shè)置溫度)是否穩(wěn)定,CAD檢測器的載氣流速、氣體壓力是否正常等。

03
方法的穩(wěn)定性問題
1)分析可離子化的化合物時,未在流動相中使用緩沖鹽,或鹽濃度不足。

2)流動相的pH與待分析物的pKa接近。

3)對流動相比例敏感,盡量使用同一臺儀器,或者流動相預混并記錄好具體混合方法,包括試劑的添加順序,甚至記錄量取時的試劑溫度。

4)緩沖溶液的pH須在加入有機相前進行調(diào)節(jié)。

04
結(jié)語

高效液相色譜方法重現(xiàn)性好是確保分析結(jié)果可靠性的關(guān)鍵因素??梢酝ㄟ^色譜柱、儀器系統(tǒng)、方法本身的穩(wěn)定性這三方面去排查和優(yōu)化,有效提升HPLC色譜峰面積的重現(xiàn)性,為科研和生產(chǎn)提供更加準確、可靠的分析數(shù)據(jù)支持。


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