影響反相鍵合相色譜柱性能的因素有哪些呢。

　　一，硅膠純度。

　　硅膠純度對(duì)峰形有很大液相，硅膠雜質(zhì)和殘留的金屬離子會(huì)影響樣品的峰形，如果硅膠表面的金屬含量高會(huì)影響堿性化合物的峰形，易發(fā)生拖尾，恒譜生USHAC18色譜柱以全覆蓋的鍵合硅膠為填料，具有優(yōu)異的穩(wěn)定性，重復(fù)性，高選擇性和高分離度等特點(diǎn)。

　　二，顆粒形狀及粒徑。

　　球形顆粒柱效高，重現(xiàn)性好，柱床結(jié)構(gòu)均勻，不規(guī)則的顆粒柱床結(jié)構(gòu)不均勻，流動(dòng)相線速度不均勻，容易形成譜帶展寬，平均顆粒直徑，粒徑越小，柱效越高，柱壓也越高，粒徑分布越廣則柱效越低色譜柱，壓力越大，恒譜生色譜填料均采用球形形狀，列如USHBSil色譜柱采用高純度球形硅膠，金屬雜質(zhì)＜10ppm，具有柱效高和峰形好等特點(diǎn)，可用于分離極性和堿性的有機(jī)化合物。

　　三，顆粒表面積。

　　相對(duì)而言，高表面積對(duì)樣品具有較強(qiáng)的保留能力，更大的柱容量和分離度，而低表面積能更快達(dá)到平衡狀態(tài)，更適合梯度洗脫程序。

　　常用的涂漬方法：。

　　（1）“常規(guī)”涂漬法，對(duì)配比大于5%以上（所謂配比，即固定液與載體的重量比）的固定液，可用“常規(guī)”涂漬，其方法是：將一定量的固定液放置在一蒸發(fā)皿中，加入適量的溶劑色譜柱，待固定液溶解后，再加入定量的載體，在一般實(shí)驗(yàn)室的條件下，固定液可借助溶劑作用涂敷在載體表面上，例如：10%鯊魚烷固定相的制備即可采用“常規(guī)”涂漬法，在粗天平上稱取3g的鯊魚烷放在蒸發(fā)皿中，在通風(fēng)柜中加入能保證完全浸沒(méi)載體的乙醚溶劑，使3g鯊魚烷完全溶解后，再徐徐加入30g60——80目的6210載體，固定液在溶劑的作用下涂敷在載體表面上，最后把涂漬上固定液的載體在紅外燈下輕輕攪拌，烘干并趕走溶劑，一般要求，烘干后的固定相基本不應(yīng)有溶劑氣味，這樣才可裝入色譜柱老化后使用。

　　色譜柱對(duì)于配比高的固定液，“常規(guī)”法完全可以滿足其涂漬要求，因?yàn)樵诟邷乩匣瘯r(shí)，固定液還有重新均勻分布的機(jī)會(huì)，但對(duì)于配比小于3%的固定液，由于固定液含量少，剛剛鋪蓋其載體表面時(shí)，如果涂漬不均勻，老化也不能完全解決問(wèn)題，只能采用下述兩種方法涂漬。

　?。?）抽空盤涂法，在一個(gè)蒸發(fā)皿或一個(gè)盤中，稱取一定量固定液，加入適量的溶劑（合適的量可以按下表大致求出），待其完全溶解后，再加入一定量的載體，將器皿置于真空干燥器中，接水泵抽空5min，脫氣，然后取出放在通風(fēng)柜中，讓溶劑自然蒸發(fā)或紅外燈下烘干，不要攪拌也不要過(guò)篩。

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